食品科學論文編號:SP012  論文字數:32453,頁數:58

目錄
第一部分 前言 2
1尿酸酶的研究簡史[3，4] 3
2核酸疫苗 4
2.1質粒載體的生物學特征 5
2.2 pET28a和pcDNA3.1-Uc的結構特征 5
3酶類制劑 7
3.1酶純化方法[10] 8
3.2酶含量的測定 9
3.3尿酸酶活性的測定方法[12] 9
3.3.1終止反應法（Stopped Method） 9
3.3.2連續反應法（Continuous Method） 10
4高尿酸血癥動物模型的研究[14] 10
4.1建立高尿酸酶血癥動物模型的基本原理 11
4.2動物的選擇 12
4.3 雞痛風病模型的研制 13
5 實驗目的和意義 15
第二部分 尿酸酶的核酸（pcDNA3.1-UC質粒）制劑在雞體內的表達研究 15
1材料與方法 15
1.1 材料 15
1.1.1 菌種和質粒 15
1.1.2試劑和溶液配置 15
1.1.3 儀器 19
1.2實驗方法 20
1.2.1菌體的活化 20
1.2.2質粒pcDNA3.1-UC大量制備 20
1.2.3質粒pcDNA3.1-UC的瓊脂糖凝膠電泳 21
1.2.4經RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC質粒的瓊脂糖凝膠電泳 21
1.2.5離子交換層析純化pcDNA3.1-UC質粒 21
1.2.6 PCR鑒定純化質粒為pcDNA3.1-UC 23
1.2.7 pcDNA3.1-UC質粒在雞體內的表達的檢測 24
2結果與分析 27
2.1 電泳檢測提取的pcDNA3.1-UC質粒 27
2.2經RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC質粒的瓊脂糖凝膠電泳檢測 27
2.3 DEAE離子交換層析曲線 28
2.4 純化質粒為pcDNA3.1-UC PCR鑒定 29
2.5 pcDNA3.1-UC質粒在雞體內的表達分析 29
2.5.1質粒DNA溶液濃度的測定實驗結果 29
2.5.2 雞血清尿酸含量測定試驗結果: 30
3討論 34
第三部分 尿酸酶制劑在雞體內的應用研究 34
1材料與方法 34
1.1材料 34
1.1.1菌種 34
1.1.2 試劑及其配置 34
1.1.3 儀器 37
1.2 實驗方法 38
1.2.1 酶活性的檢測 38
1.2.2菌體的培養及誘導表達 39
1.2.3表達產物的提取 39
1.2.4硫酸銨分段鹽析 40
1.2.5 酶蛋白濃縮 40
1.2.6分子篩層析分離BL21/ pET28a-UC表達產物 40
1.2.7 雞血清尿酸含量測定 43
1.2.8 ELISA實驗檢測雞尿酸酶抗體 44
2 結果與分析 46
2.1分子篩（sephadex-200）純化BL21/ pET28a-UC表達產物的結果 46
2.2尿酸酶溶液中酶活性測定的實驗結果 46
2.3 酶蛋白的DEAE離子交換曲線及結果 47
2.4尿酸酶溶液的濃度測定實驗結果 48
2.5已純化的尿酸酶SDS PAGE結果 48
2.6 雞尿酸含量測定試驗結果 49
2.7 ELISA實驗結果 52
3討論 53
第四部分 創新點與總結 53
參考文獻 54
致謝 58