目錄

一 引言 1

二 材料與方法 2

（一） 試劑與儀器 2

1 藥品與試劑 2

2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 3

3 實(shí)驗(yàn)儀器 3

（二） 試驗(yàn)方法 3

1 色譜分析方法 3

2 血漿樣品的處理與制備 3

3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 4

4 方法回收率和精密度 4

5藥物動(dòng)力學(xué)研究 4

三 結(jié)果 5

（一） 色譜圖及特異性分析 5

（二） 色譜分析條件的優(yōu)化 6

（三） 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 7

（四） 回收率和精密度 7

（五） 血清中華法林藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算 8

四 討論 9

（一）華法林HPLC檢測(cè)方法 9

（二）華法林華法林藥代動(dòng)力學(xué) 10

五 結(jié)論 10

參考文獻(xiàn) 11

一 引言

 

   華法林是20世紀(jì)40年代上市的雙香豆素口服抗凝藥，由美國Wisconsin大學(xué)研究并合成的化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為3-（a-苯基丙酮）-4-羥基香豆素。華法林是通過抑制羧基化酶發(fā)揮其抗凝作用，凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的谷氨酸需要羧基化轉(zhuǎn)變?yōu)棣?羧基谷氨酸后才能結(jié)合到磷脂表面，發(fā)揮使血液凝固的過程加快速度的作用。其作為維生素K依賴性因子，整個(gè)γ-羧基化的進(jìn)程需要還原型維生素K的參加。華法林的作用就是使維生素K環(huán)氧化物還原酶的活性降低，使得還原性維生素K的不能生成。正是因?yàn)檫@種抗凝機(jī)理使得華法林對(duì)已經(jīng)在體內(nèi)生成的凝血因子并無抗凝的作用，只有等到原有的凝血因子全部經(jīng)過代謝消耗完了之后，才能發(fā)揮抗凝效應(yīng)。因?yàn)槿A法林的自身的抗凝原理的限制，所以其起效相對(duì)緩慢，僅在體內(nèi)有效不可作為體外抗凝劑使用，停藥后也需要等到維生素 K 依賴性因子逐漸恢復(fù)到一定濃度后，抗凝作用才消失，所以其藥效持續(xù)時(shí)間較長。華法林的藥效要明顯優(yōu)于阿司匹林，但起效時(shí)間明顯慢于肝素且不能體外使用。   

   隨著我國經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人均收入顯著提高的，人們?cè)陲嬍成献非蟾�加精�?xì)且經(jīng)常大魚大肉，我國有心血管疾病患者越來越多，華法林的因其療效顯著、作用時(shí)間持久同時(shí)作為口服藥服用方便、價(jià)格低廉而廣泛應(yīng)用于心臟人工瓣膜置換術(shù)后的治療[1]，是我國目前抗凝治療最常用使用的口服抗凝血藥。雖然是目前最普遍的口服類型抗凝藥，但其也存在許多不足的地方[2]，如中毒劑量與有效治療劑量相接近治療窗小，而且即使是相同的劑量個(gè)體的反應(yīng)完全不相同，同一個(gè)體在每個(gè)時(shí)間段所需的藥物劑量都可能不相同，所服的劑量稍微多一點(diǎn)過多或者少一點(diǎn)點(diǎn)，都極易出現(xiàn)血栓或者出血的現(xiàn)象[3]。最重要的是，影響華法林發(fā)揮藥效的因素很多。遺傳基因的差異、個(gè)體自身的差異、其他藥物的相互作用等都會(huì)影響藥效。不地區(qū)、不同膚色的人群對(duì)華法林的敏感性有較大的差異，目前許多國際研究機(jī)構(gòu)都對(duì)華法林的基因影響因素進(jìn)行研究，研究認(rèn)為VKORC1及細(xì)胞色素P450酶 2C9(CYP 2C9)的基因多態(tài)性導(dǎo)致華法林劑量的個(gè)體差異[4-9]，并得出個(gè)體化的用藥劑量公式 。華法林個(gè)體差異在患者中更大。營養(yǎng)不良、腹瀉、嘔吐、手術(shù)創(chuàng)傷、低蛋白血癥等疾病因素[10]，使患者對(duì)華法林的敏感性增加以致華法林抗凝作用增強(qiáng)，而胃病或者不恰當(dāng)?shù)娘嬍沉?xí)慣則會(huì)影響華法林的吸收或者抵消華法林的作用。許多藥物與華法林的相互作用都能引起華法林在個(gè)體體內(nèi)的吸收與代謝清除的差異[10-11]，華法林作為口服藥主要通過消化道迅速吸收，幾乎完全通過肝臟代謝清除。消膽胺等藥物影響胃腸道對(duì)其的吸收、代謝清除影響藥效學(xué)；華法林作為羧基化酶的抑制劑，具有較強(qiáng)的抗凝作用，當(dāng)然與其他一些具有抗凝作用藥物聯(lián)用時(shí)勢(shì)必會(huì)增加抗凝的強(qiáng)度，增加華法林的出現(xiàn)出血并發(fā)癥的概率，例如非甾體類抗炎藥和阿司匹林、高劑量盤尼西林。在眾多的藥物中要尤其關(guān)注阿司匹林，因?yàn)榘⑺酒チ肿饔脮r(shí)間長且在臨床中被廣泛應(yīng)用[12-13] 。因此為了預(yù)防出現(xiàn)不良反應(yīng)，醫(yī)生在使用華法林的時(shí)候要注意藥物的配伍，要考慮到其他藥物是否會(huì)增加華法林的血藥濃度，必須十分精確的控制華法林的劑量，同時(shí)對(duì)患者使用華法林之后進(jìn)行密切監(jiān)測(cè)，避免并發(fā)癥出血的發(fā)生。

   目前醫(yī)生主要通過凝血酶原時(shí)間( prothrombin time,PT)和國際標(biāo)準(zhǔn)比值( international normalizedratio ,INR)[14]對(duì)華法林進(jìn)行抗凝作用效果的監(jiān)測(cè)，INR值是PT值經(jīng)過國際敏感指數(shù)( international sensitivity index , ISI) 校正后的數(shù)值。凝血酶原時(shí)間是心臟機(jī)械瓣膜置換術(shù)后抗凝監(jiān)測(cè)中應(yīng)用最早的的監(jiān)測(cè)方法，因其使用方便、快速得以迅速推廣成為華法林抗凝監(jiān)測(cè)的基礎(chǔ)方法。該方法的不足也十分明顯：使用的受試劑對(duì)結(jié)果的影響很大，因此其的參考性就較差，容易出現(xiàn)抗凝治療失誤導(dǎo)致抗凝過度。INR因?yàn)橄�除了PT檢測(cè)中的一些不足，其數(shù)據(jù)更加合理，所以IRN得到了迅速推廣[14]。近年來, 醫(yī)生通過監(jiān)測(cè)患者服用藥品的INR 值來指導(dǎo)和調(diào)整華法林的劑量，但由于其數(shù)值本身的存在一定的局限性、患者的個(gè)人差異較為明顯，同時(shí)患者在服用藥物后與醫(yī)生的信息交流不及時(shí)，出現(xiàn)出血等并發(fā)癥的情況時(shí)有出現(xiàn) [15] 。

   目前國內(nèi)外對(duì)心臟瓣膜置換病人的華法林應(yīng)用頗感興趣[14、16]，尤其是初始劑量的合理性多有研究，但是臨床醫(yī)生對(duì)華法林的了解、掌握的程度并不夠，而且華法林鈉的使用說明書上出血并發(fā)癥的出現(xiàn)率為8%。因此存在醫(yī)生過于擔(dān)心患者服用華法林后導(dǎo)致出血，而拒絕給予患者華法林治療的現(xiàn)象。在患者初期使用華法林的劑量是難以把握的，也是最難監(jiān)測(cè)的階段，目前華法林的抗凝監(jiān)測(cè)主要是通過PT和INR，但是在服用華法林的初期PT和INR的值變化不顯著，PT和INR值真正完全反映華法林的抗凝作用要在其服用72個(gè)小時(shí)后。如果在抗凝初期過于相信INR極有可能會(huì)出現(xiàn)抗凝過度出血的情況[16-17]。因此研究體內(nèi)的血漿中華法林的藥學(xué)動(dòng)力學(xué)，探明華法林在人體內(nèi)的分布代謝情況對(duì)于華法林的初始劑量的大小的探究很有價(jià)值，開發(fā)一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、不受干擾和足夠容易地在醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的的高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)方法，用于監(jiān)測(cè)抗凝治療患者華法林血藥濃度水平，同時(shí)與PT及INR等抗凝監(jiān)測(cè)指標(biāo)結(jié)合[18]，有利于提高抗凝監(jiān)測(cè)的準(zhǔn)確性，減少抗凝并發(fā)癥的發(fā)生，指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理調(diào)整給藥方案，使患者的血漿中華法林的濃度處于一個(gè)相對(duì)安全有效的值，將該值與INR值相結(jié)合，判斷華法林真正的抗凝強(qiáng)度，提高華法林的安全性，使其濃度在治療窗之內(nèi)，減少不良反應(yīng)以及并發(fā)癥的發(fā)生率。